【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品處理及模板準(zhǔn)備
推薦采用廣州悅洋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的病毒 DNA/RNA 提取試劑盒,按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
1.2 熒光 PCR 擴(kuò)增
開(kāi)機(jī)預(yù)熱并檢驗(yàn)儀器性能后,取PCR 反應(yīng)管分別加入5 微升提取好的核酸和陰陽(yáng)對(duì)照,標(biāo)記后放置在熒光PCR 樣品槽相應(yīng)位置,記錄順序,按下表2 設(shè)置擴(kuò)增參數(shù),進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。
2 判定
2.1 合理調(diào)整閾值線,不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進(jìn)行調(diào)整。
2.2 試劑盒有效性判定
·陰性對(duì)照:無(wú)Ct 值,線形為直線或微斜,無(wú)明顯指數(shù)增長(zhǎng)。
·陽(yáng)性對(duì)照:FAM(衣原體)和 HEX(支原體)通道 Ct 值≤30,有明顯指數(shù)增長(zhǎng),呈典型的S 型曲線。
2.3 樣本結(jié)果判定
陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤38,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。
可疑:檢測(cè)通道 38<Ct 值≤40 ,建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果仍為 38<Ct 值≤40 和明顯擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。
(更詳細(xì)資料請(qǐng)參照說(shuō)明書(shū))